高山紅景天甙對(duì)阿霉素腎病大鼠MMP 、TGF及IL的影響

　　腎小球疾病主要侵犯雙腎腎小球，是引起慢性腎衰（尿毒癥）的主要疾病［1］。目前多數(shù)認(rèn)為起病為免疫失調(diào)，循環(huán)免疫復(fù)合物沉積及原位免疫復(fù)合物形成產(chǎn)生炎癥而致病［1］。高山紅景天是長(zhǎng)白山地區(qū)珍稀藥物植物，抗炎、抗脂質(zhì)過(guò)氧化、增強(qiáng)SOD活性、清除自由基、雙向調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫力［2，3］。喂服紅景天可降低阿霉素大鼠尿蛋白及血脂［4］，紅景天制劑對(duì)腎炎有治療作用［5］ 。本試驗(yàn)探討高山紅景天能否干預(yù)細(xì)胞外基質(zhì)降解而延緩腎小球硬化。

　　1  材料與方法

　　1.1  主要材料

　　1.1.1  動(dòng)物  30只Wistar雌性大鼠，體重180～200g/只，購(gòu)自吉林大學(xué)動(dòng)物部。

　　1.1.2  高山紅景天甙  吉大二院腎內(nèi)研究室提取。

　　1.1.3  阿霉素  由深圳萬(wàn)樂藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。

　　1.1.4  蛋白酶試劑盒  購(gòu)自上海森雄科技實(shí)業(yè)有限公司。

　　1.1.5  ELX800酶標(biāo)儀、CL-5000超低溫冰箱  日本產(chǎn)。

　　1.1.6  日立生化分析儀  日本產(chǎn)。

　　1.2  實(shí)驗(yàn)方法

　　1.2.1  腎炎模型建立  參照魯斌等［6］阿霉素腎病模型的制作方法。分3次大鼠尾靜脈注射阿霉素，間隔7天先后按3mg/kg、2mg/kg、2mg/kg體重給藥，第21天后留取尿液，查24h尿蛋白定量。

　　1.2.2  動(dòng)物分組  隨機(jī)將30只大鼠分為：（1）正常組（n=10）；（2）模型組（n=10）：制作模型成功后，未給予藥物治療；（3）治療組（n=10）：模型成功后，每日給予紅景天甙液1.5ml（相當(dāng)于生藥20g/kg體重），連續(xù)灌胃28天。

　　1.2.3  觀察指標(biāo)與方法  于治療前及完成后，以代謝籠收集各組大鼠24h尿液，磺基水楊酸比濁法測(cè)定尿蛋白含量，用ELISA方法分別檢測(cè)各組血清MMP-2 、MMP-9、TGF-β1、IL-10、IL-2的含量，并測(cè)肝功、腎功、血膽固醇。

　　1.2.4  統(tǒng)計(jì)學(xué)方法  對(duì)各組結(jié)果進(jìn)行組間t檢驗(yàn)，結(jié)果以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

　　2  結(jié)果

　　2.1  尿蛋白含量（mg/24h）變化測(cè)定結(jié)果  見表1。表1  尿蛋白含量（mg/24h)變化測(cè)定  （略）注：與正常組相比*P<0.01

　　治療后大鼠尿蛋白含量降低（P<0.01），未達(dá)到正常組的水平，而模型組的尿蛋白仍有增加，但P>0.05。

　　2.2  經(jīng)紅景天治療后腎炎大鼠血生化指標(biāo)變化  見表2。 表2  紅景天治療后腎炎大鼠血生化指標(biāo)變化  （略）注：與正常組相比ΔP>0.05，與正常組相比※P<0.05、與模型組相比☆P<0.05

　　治療后腎炎大鼠血谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶及肌酐變化不明顯，血白蛋白回升（P<0.05）、膽固醇也有所下降（P<0.05），未達(dá)到正常。

　　2.3  高山紅景天治療后各組血清MMP-2、MMP-9、TGF-β1、IL-10、IL-2  見表3。表3  高山紅景天治療后各組血清值比較  （略）注：P1治療組與正常組相比；P2為治療組與模型組相比。▼為與以往報(bào)道不符較正常低。※為模型組與正常組比

　　MMP-2模型組較正常組明顯增加P<0.05；MMP-9模型組較正常組明顯減少P<0.05，治療組均較模型組明顯增加并超過(guò)正常組（P<0.05）。TGF-β1模型組較正常組增加P<0.05；治療組較模型組明顯下降（P<0.05），較正常組也低且P<0.05。IL-10模型組較正常組降低P<0.05，治療組較模型組明顯增加（P<0.05），并高于正常組。IL-2治療后降低但P>0.05。

　　3  討論

　　治療后尿蛋白下降（P<0.01），治療有效，未達(dá)到正常組水平，可能單用紅景天甙腎炎未完全緩解，需合用其他藥物，也可能療程不夠。阿霉素制作的急性腎病模型類似于人類微小病變表現(xiàn)，而慢性腎病模型類似于人類慢性腎炎或局灶節(jié)段性腎小球硬化［6］。近年來(lái)認(rèn)為ADR大鼠腎病模型是自由基產(chǎn)生，脂質(zhì)過(guò)氧化物形成，造成腎小球電荷障損害和分子控制缺乏，腎小球通透性改變和腎小管重吸收障礙［7］，尿蛋白下降可能與抗自由基、調(diào)節(jié)免疫及抗炎作用有關(guān)，阻止腎小球?yàn)V過(guò)膜涎蛋白破壞，維持電荷屏障的完整性，減少尿蛋白的濾出。

　　基質(zhì)金屬蛋白酶類（MMPs）分五類，MMP-2、 MMP-9屬明膠酶類，主要降解ECM的主要成分之一Ⅳ型膠原［4，8］，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGF-β1）增加基質(zhì)的產(chǎn)生、抑制降解［9］，可能是上調(diào)PAI-1的表達(dá)，抑制纖溶酶及MMPs ［3］。腎小球疾病進(jìn)展的重要病理基礎(chǔ)是腎小球細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）積聚［10］，主要原因是ECM合成與降解的失衡［11］。MMP增加、TGF-β1下降，提示促進(jìn)ECM降解，延緩腎小球硬化。模型組MMP-9含量降低與文獻(xiàn)報(bào)道不符，在腎炎進(jìn)展時(shí)，MMP早期代償性增加以促進(jìn)ECM降解［12］。原因考慮病情重發(fā)病早期即代償能力低下，MMP-9未能升高。

　　致炎性與抗炎性細(xì)胞因子在腎小球疾病中也發(fā)揮重要作用。抗炎性因子如 IL-4、IL-6、IL-10、IL-13等可拮抗致炎性因子IL-1、IL-2、TNF等的產(chǎn)生及致炎作用，影響腎臟炎癥性疾病［12］。近年報(bào)道IL-10有利于緩解纖維化［13］；腎病及腎炎活動(dòng)期血清及尿液ｓIL-２Ｒ濃度分別高于緩解期，IL-２促進(jìn)上皮細(xì)胞合成含硫化合物和蛋白質(zhì)［12］，IL-２加速腎炎進(jìn)展。IL-10模型組較正常組降低（P<0.05），治療組較模型組明顯增加（P<0.05），并高于正常組。支持紅景天治療腎炎有效。IL-2各組比較P>0.05，但有降低趨勢(shì)，支持紅景天療效。

　　同時(shí)高山紅景天甙對(duì)腎炎大鼠及正常大鼠的肝功能、腎功能無(wú)明顯影響；而且治療后的大鼠血膽固醇有所下降（P<0.05），血漿白蛋白有所上升（P<0.05）。

　　綜上所述，研究結(jié)果表明，高山紅景天甙對(duì)腎小球腎炎具有明顯的治療作用，通過(guò)調(diào)節(jié)合成、降解酶及干預(yù)細(xì)胞因子影響ECM降解，延緩腎小球硬化；并且無(wú)明顯毒副作用。此研究不僅為腎小球腎炎的治療提供了一種新途徑，同時(shí)也為高山紅景天甙的開發(fā)及應(yīng)用于臨床提供了理論依據(jù)。

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