高山紅景天甙對阿霉素腎病大鼠MMP 、TGF及IL的影響

　　腎小球疾病主要侵犯雙腎腎小球，是引起慢性腎衰（尿毒癥）的主要疾病［1］。目前多數認為起病為免疫失調，循環免疫復合物沉積及原位免疫復合物形成產生炎癥而致病［1］。高山紅景天是長白山地區珍稀藥物植物，抗炎、抗脂質過氧化、增強SOD活性、清除自由基、雙向調節機體的免疫力［2，3］。喂服紅景天可降低阿霉素大鼠尿蛋白及血脂［4］，紅景天制劑對腎炎有治療作用［5］ 。本試驗探討高山紅景天能否干預細胞外基質降解而延緩腎小球硬化。

　　1  材料與方法

　　1.1  主要材料

　　1.1.1  動物  30只Wistar雌性大鼠，體重180～200g/只，購自吉林大學動物部。

　　1.1.2  高山紅景天甙  吉大二院腎內研究室提取。

　　1.1.3  阿霉素  由深圳萬樂藥業有限公司生產。

　　1.1.4  蛋白酶試劑盒  購自上海森雄科技實業有限公司。

　　1.1.5  ELX800酶標儀、CL-5000超低溫冰箱  日本產。

　　1.1.6  日立生化分析儀  日本產。

　　1.2  實驗方法

　　1.2.1  腎炎模型建立  參照魯斌等［6］阿霉素腎病模型的制作方法。分3次大鼠尾靜脈注射阿霉素，間隔7天先后按3mg/kg、2mg/kg、2mg/kg體重給藥，第21天后留取尿液，查24h尿蛋白定量。

　　1.2.2  動物分組  隨機將30只大鼠分為：（1）正常組（n=10）；（2）模型組（n=10）：制作模型成功后，未給予藥物治療；（3）治療組（n=10）：模型成功后，每日給予紅景天甙液1.5ml（相當于生藥20g/kg體重），連續灌胃28天。

　　1.2.3  觀察指標與方法  于治療前及完成后，以代謝籠收集各組大鼠24h尿液，磺基水楊酸比濁法測定尿蛋白含量，用ELISA方法分別檢測各組血清MMP-2 、MMP-9、TGF-β1、IL-10、IL-2的含量，并測肝功、腎功、血膽固醇。

　　1.2.4  統計學方法  對各組結果進行組間t檢驗，結果以均數土標準差（x±s）表示，P<0.05為有統計學差異。

　　2  結果

　　2.1  尿蛋白含量（mg/24h）變化測定結果  見表1。表1  尿蛋白含量（mg/24h)變化測定  （略）注：與正常組相比*P<0.01

　　治療后大鼠尿蛋白含量降低（P<0.01），未達到正常組的水平，而模型組的尿蛋白仍有增加，但P>0.05。

　　2.2  經紅景天治療后腎炎大鼠血生化指標變化  見表2。 表2  紅景天治療后腎炎大鼠血生化指標變化  （略）注：與正常組相比ΔP>0.05，與正常組相比※P<0.05、與模型組相比☆P<0.05

　　治療后腎炎大鼠血谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶及肌酐變化不明顯，血白蛋白回升（P<0.05）、膽固醇也有所下降（P<0.05），未達到正常。

　　2.3  高山紅景天治療后各組血清MMP-2、MMP-9、TGF-β1、IL-10、IL-2  見表3。表3  高山紅景天治療后各組血清值比較  （略）注：P1治療組與正常組相比；P2為治療組與模型組相比。▼為與以往報道不符較正常低。※為模型組與正常組比

　　MMP-2模型組較正常組明顯增加P<0.05；MMP-9模型組較正常組明顯減少P<0.05，治療組均較模型組明顯增加并超過正常組（P<0.05）。TGF-β1模型組較正常組增加P<0.05；治療組較模型組明顯下降（P<0.05），較正常組也低且P<0.05。IL-10模型組較正常組降低P<0.05，治療組較模型組明顯增加（P<0.05），并高于正常組。IL-2治療后降低但P>0.05。

　　3  討論

　　治療后尿蛋白下降（P<0.01），治療有效，未達到正常組水平，可能單用紅景天甙腎炎未完全緩解，需合用其他藥物，也可能療程不夠。阿霉素制作的急性腎病模型類似于人類微小病變表現，而慢性腎病模型類似于人類慢性腎炎或局灶節段性腎小球硬化［6］。近年來認為ADR大鼠腎病模型是自由基產生，脂質過氧化物形成，造成腎小球電荷障損害和分子控制缺乏，腎小球通透性改變和腎小管重吸收障礙［7］，尿蛋白下降可能與抗自由基、調節免疫及抗炎作用有關，阻止腎小球濾過膜涎蛋白破壞，維持電荷屏障的完整性，減少尿蛋白的濾出。

　　基質金屬蛋白酶類（MMPs）分五類，MMP-2、 MMP-9屬明膠酶類，主要降解ECM的主要成分之一Ⅳ型膠原［4，8］，轉化生長因子β1（TGF-β1）增加基質的產生、抑制降解［9］，可能是上調PAI-1的表達，抑制纖溶酶及MMPs ［3］。腎小球疾病進展的重要病理基礎是腎小球細胞外基質（ECM）積聚［10］，主要原因是ECM合成與降解的失衡［11］。MMP增加、TGF-β1下降，提示促進ECM降解，延緩腎小球硬化。模型組MMP-9含量降低與文獻報道不符，在腎炎進展時，MMP早期代償性增加以促進ECM降解［12］。原因考慮病情重發病早期即代償能力低下，MMP-9未能升高。

　　致炎性與抗炎性細胞因子在腎小球疾病中也發揮重要作用。抗炎性因子如 IL-4、IL-6、IL-10、IL-13等可拮抗致炎性因子IL-1、IL-2、TNF等的產生及致炎作用，影響腎臟炎癥性疾病［12］。近年報道IL-10有利于緩解纖維化［13］；腎病及腎炎活動期血清及尿液ｓIL-２Ｒ濃度分別高于緩解期，IL-２促進上皮細胞合成含硫化合物和蛋白質［12］，IL-２加速腎炎進展。IL-10模型組較正常組降低（P<0.05），治療組較模型組明顯增加（P<0.05），并高于正常組。支持紅景天治療腎炎有效。IL-2各組比較P>0.05，但有降低趨勢，支持紅景天療效。

　　同時高山紅景天甙對腎炎大鼠及正常大鼠的肝功能、腎功能無明顯影響；而且治療后的大鼠血膽固醇有所下降（P<0.05），血漿白蛋白有所上升（P<0.05）。

　　綜上所述，研究結果表明，高山紅景天甙對腎小球腎炎具有明顯的治療作用，通過調節合成、降解酶及干預細胞因子影響ECM降解，延緩腎小球硬化；并且無明顯毒副作用。此研究不僅為腎小球腎炎的治療提供了一種新途徑，同時也為高山紅景天甙的開發及應用于臨床提供了理論依據。

　　【參考文獻】

　　1  葉任高，陸再英.內科學，第五版.北京：人民衛生出版社，2001，518-519.

　　2  吳維春.高山紅景天.長春：吉林科學技術出版社，1987，45-57.

　　3  林文生，張農，張頌文，等.反義轉化生長因子β1基因轉染大鼠腎系膜細胞及其對纖溶酶原激活物抑制劑1和基質金屬蛋白酶家族表達的影響.中華病理學雜志， 2000，29(4): 284-285.

　　4  Borkakoti N. Matrix metalloproteinase:Variations on a theme.Prog Biophys Mol Biol， 1998，70(1):73-74.

　　5  孫波，徐君東，閆國強，等.紅景天對阿霉素大鼠尿蛋白、血脂的影響.中醫藥學報，2001，29(1):43-45.

　　6  魯斌，李新民，馬融.對改良的阿霉素腎病模型的評價.實驗動物科學與管理，1999，16（3）：5.

　　7  張秋楓，鄭榮秀，田迎春.對改良的阿霉素腎病模型的評價，現代康復，1998，2（6）：251-253

　　8  MassovaL.FASEBJ， 1998，12(12):1075-1095.

　　9  王偉銘，姚建，石蓉，等.TGF-β1對腎間質成纖維細胞Ⅲ型膠原表達的影響.細胞與分子免學雜志，2000，16(1): 29-31.

　　10  秦蓉.PAI-1及其在腎小球硬化中的作用及意義.臨床與實驗病理學雜志，1998，14（6）：579.

　　11  Vssalli JD，Sappino AP，Belin D.The plasminogen activator/plasmin system.J Clin Invest，1991，88:1067

　　12  湯顫，袁發煥.金屬蛋白酶組織抑制因子-1、基質金屬蛋白酶－9的表達與腎臟纖維化的關系.中國現代醫學雜志， 2002，12(2): 284-285.